2017-10-12 臨床檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)
臨床微生物檢驗(yàn)過程中，有很多培養(yǎng)基，你是否還在因?yàn)橘I了一批用不完過期而煩惱呢？現(xiàn)在就告訴大家一下配方，我們隨時(shí)用隨時(shí)配，方便、節(jié)約成本。你要覺得有用，趕緊轉(zhuǎn)走吧。
目錄
01糖發(fā)酵管
02 ONPG培養(yǎng)基
03西蒙氏檸檬酸鹽培養(yǎng)基
04緩沖葡萄糖蛋白胨水(MR和VP試驗(yàn)用)
05克氏檸檬酸鹽培養(yǎng)基
06丙二酸鈉培養(yǎng)基
07葡葡糖銨培養(yǎng)基
08 Hugh-Leifson培養(yǎng)基(O/F試驗(yàn)用)
09 馬尿酸鈉培養(yǎng)基
10營(yíng)養(yǎng)明膠
11苯丙氨酸培養(yǎng)基
12 氨基酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基
13蛋白胨水(靛基質(zhì)試驗(yàn)用)
14 硫酸亞鐵瓊脂(硫化氫試驗(yàn)用)
15 尿素瓊脂
16 氰化鉀(KCN)培養(yǎng)基
17 氧化酶試驗(yàn)
18 硝酸鹽培養(yǎng)基
19 細(xì)胞色素氧化酶試驗(yàn)
20 過氧化氫酶試驗(yàn)
21 過氧化物酶試驗(yàn)
22 磷酸鹽緩沖液
23明膠磷酸鹽緩沖液
24 乳酸-苯酚溶液
25 肉浸液肉湯
26肉浸液瓊脂
27牛肉(或牛心)消化湯
28血消化湯
29豆粉瓊脂
30血瓊脂
31營(yíng)養(yǎng)瓊脂
32營(yíng)養(yǎng)肉湯
33 乳糖膽鹽發(fā)酵管
34乳糖發(fā)酵管
35 EC肉湯
36 緩沖蛋白胨水(BP)
37 氯化鎂孔雀綠增菌液(MM)
38 四硫磺酸鈉煌綠增菌液(TTB)
39 四硫磺酸鈉煌綠增菌液(換用方法)
40 亞硒酸鹽胱氨酸增菌液(SC)
41 GN增菌液
42 腸道菌增菌肉湯
43 亞硫酸鉍瓊脂(BS)
44 DHL瓊脂
45 HE瓊脂
46 SS瓊脂
47 WS瓊脂
48 麥康凱瓊脂
49 伊紅美藍(lán)瓊脂(EMB)
50三糖鐵瓊脂(TSI)
51 三糖鐵瓊脂(換用方法)
52 克氏雙糖鐵瓊脂(KI)
53 克氏雙糖鐵瓊脂(換用方法)
54 葡萄糖半固體發(fā)酵管
55 5%乳糖發(fā)酵管
56 CAYE培養(yǎng)基
57 Honda氏產(chǎn)毒肉湯
58 Elek氏培養(yǎng)基(毒素測(cè)定用)
59 氯化鎂孔雀綠羧芐青霉素培養(yǎng)基
60 胰蛋白胨水
61 Rustigian氏尿素培養(yǎng)液
62 氯化鈉結(jié)晶紫增菌液
63 氯化鈉蔗糖瓊脂
64 嗜鹽菌選擇性瓊脂
65 3.5%氯化鈉三糖鐵瓊脂
66 氯化鈉血瓊脂
67 3.5%氯化鈉生化試驗(yàn)培養(yǎng)基
68 改良磷酸鹽緩沖液(小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌專用)
69 CIN-1培養(yǎng)基
70 嗜鹽性試驗(yàn)培養(yǎng)基
01 、糖發(fā)酵管
成分：
牛肉膏 5g
蛋白胨 10g
氯化鈉 3g
磷酸氫二鈉(Na2HPO4·12H2O) 2g
0.2%滇麝香草酚藍(lán)溶液 12mL
蒸餾水 1000mL
pH7.4
制法：
1、葡萄糖發(fā)酵管按上述成分配好后,按0.5%加入葡萄糖,分裝于有一個(gè)倒置小管的小試管內(nèi),121℃高壓滅菌15min.
2、其他各種糖發(fā)酵管可按上述成分配好后,分裝每瓶100mL,121℃高壓滅菌15min.另將各種糖類分別配好10%溶液,同時(shí)高壓滅菌.將5mL糖溶液加入于100mL培養(yǎng)基內(nèi),以無菌操作分裝小試管.
注：蔗糖不純,加熱后會(huì)自行水解者,應(yīng)采用過濾法除菌.
試驗(yàn)方法:從瓊脂斜面上挑取小量培養(yǎng)物接種,于36℃±1℃培養(yǎng),一般觀察2～3d.遲緩反應(yīng)需觀察14～30d.
02 、ONPG培養(yǎng)基
成分：
鄰硝基酚β-D-半乳糖昔(ONPG) 60mg
(O-Nitrophenyl-β-D-galactopyranoside)
0.01mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5) 10mL
1%蛋白胨水(PH7.5) 30mL
制法:將ONPG溶于緩沖液內(nèi),加入蛋白胨水,以過濾法除菌,分裝于10mm×75mm試管,每管0.5mL,用橡皮塞塞緊.
試驗(yàn)方法:自瓊脂斜面上挑取培養(yǎng)物1滿環(huán)接種,于36±1℃培養(yǎng)1～3h和24h觀察結(jié)果.如果β-半乳糖苷酶產(chǎn)生,則于1～3h變黃色,如無此酶則24h不變色.
03、 西蒙氏檸檬酸鹽培養(yǎng)基
成分:
氯化鈉 5g
硫酸鎂(MgSO4·7H2O) 0.2g
磷酸二氫銨 1g
磷酸氫二鉀 1g
檸檬酸鈉 5g
瓊脂 20g
蒸餾水 1000mL
0.2%溴麝香草酚藍(lán)溶液 40mL
pH6.8
制法:先將鹽類溶解于水內(nèi),校正pH,再加瓊脂,加熱溶化.然后加入指示劑,混合均勻后分裝試管,121℃高壓滅菌15min.放成斜面.
試驗(yàn)方法:挑取少量瓊脂培養(yǎng)物接種,于36±1℃培養(yǎng)4d,每天觀察結(jié)果.陽性者斜面上有菌落生長(zhǎng),培養(yǎng)基從綠色轉(zhuǎn)為藍(lán)色.
04 、緩沖葡萄糖蛋白胨水(MR和VP試驗(yàn)用)
成分:
磷酸氫二鉀 5g
多胨 7g
葡萄糖 5g
蒸餾水 1000mL
pH7.0
制法：溶化后校正pH,分裝試管,每管1mL,121℃高壓滅菌15min.
甲基紅(MR)試驗(yàn)：自瓊脂斜面挑取少量培養(yǎng)物接種本培養(yǎng)基中,于36±1℃培養(yǎng)2～5d,哈夫尼亞菌則應(yīng)在22～25℃培養(yǎng).滴加甲基紅試劑一滴,立即觀察結(jié)果.鮮紅色為陽性,黃色為陰性.甲基紅試劑配法:10mg甲基紅溶于30mL95%乙醇中,然后加入20mL蒸餾水.
V-P試驗(yàn)：用瓊脂培養(yǎng)物接種本培養(yǎng)基中,于36±1℃培養(yǎng)2～4d.哈夫尼亞菌則應(yīng)在22～25℃培養(yǎng).加入6%α-萘酚-乙醇溶液0.5mL和40%氫氧化鉀溶液0.2mL,充分振搖試管,觀察結(jié)果.陽性反應(yīng)立刻或于數(shù)分鐘內(nèi)出現(xiàn)紅色,如為陰性,應(yīng)放在36±1℃下培養(yǎng)4h再進(jìn)行觀察.
05、克氏檸檬酸鹽培養(yǎng)基
成分:
檸檬酸鈉 3g
葡萄糖 0.2g
酵母浸膏 0.5g
單鹽酸半胱氨酸 0.1g
磷酸二氫鉀 1g
氯化鈉 5g
0.2%酚紅溶液 6mL
瓊脂 15g
蒸餾水 1000mL
制法:加熱溶解,分裝試管,121℃高壓滅菌15min.放成斜面.
試驗(yàn)方法:用瓊脂培養(yǎng)物接種整個(gè)斜面,在36±1℃培養(yǎng)7d,每天觀察結(jié)果.陽性者培養(yǎng)基變?yōu)榧t色.
06、 丙二酸鈉培養(yǎng)基
成分:
酵母浸膏 1g
硫酸銨 2g
磷酸氫二鉀 0.6g
磷酸二氫鉀 0.4g
氯化鈉 2g
丙二酸鈉 3g
0.2%溴麝香草酚藍(lán)溶液 12mL
蒸餾水 1000mL
pH6.8
制法:先將酵母浸膏和鹽類溶解于水,校正pH后再加入指示劑,分裝試管,121℃高壓滅菌15min.
試驗(yàn)方法:用新鮮的瓊脂培養(yǎng)物接種,于36±1℃培養(yǎng)48h,觀察結(jié)果.陽性者由綠色變?yōu)樗{(lán)色.
07、 葡葡糖銨培養(yǎng)基
成分:
氯化鈉 5g
硫酸鎂(MgSO4·7H2O) 0.2g
磷酸二氫銨 1g
磷酸氫二鉀 1g
葡萄糖 2g
瓊脂 20g
蒸餾水 1000mL
0.2%溴麝香草酚藍(lán)溶液 40mL
pH6.8
制法：先將鹽類和糖溶解于水內(nèi),校正pH,再加瓊脂,加熱溶化,然后加入指示劑,混合均勻后分裝試管,121℃高壓滅菌15min,放成斜面.
試驗(yàn)方法：用接種針輕輕觸及培養(yǎng)物的表面,在鹽水管內(nèi)做成極稀的懸液,肉眼觀察不見混濁,以每一接種環(huán)內(nèi)含菌數(shù)在20～100之間為宜.將接種環(huán)滅菌后挑取菌液接種,同時(shí)再以同法接種普通斜面一支作為對(duì)照.于36±1℃培養(yǎng)24h.陽性者葡萄糖銨斜面上有正常大小的菌落生長(zhǎng);陰性者不生長(zhǎng),但在對(duì)照培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好.如在葡萄糖銨斜面生長(zhǎng)極微小的菌落可視為陰性結(jié)果.
注：容器使用前應(yīng)用清潔液浸泡.再用清水,蒸餾水沖洗干凈,并用新棉花做成棉塞,干熱滅菌后使用.如果操作時(shí)不注意,有雜質(zhì)污染時(shí),易造成假陽性的結(jié)果.
08 、Hugh-Leifson培養(yǎng)基(O/F試驗(yàn)用)
成分:
蛋白胨 2g
氯化鈉 5g
磷酸氫二鉀 0.3g
瓊脂 4g
葡萄糖 10g
0.2%溴麝香草酚藍(lán)溶液 12mL
蒸餾水 1000mL
pH7.2
制法：將蛋白胨和鹽類加水溶解后,校正pH至7.2.加入葡萄糖,瓊脂煮沸,溶化瓊脂,然后加入指示劑.混勻后,分裝試管,121℃高壓滅菌15min,直立凝固備用.
試驗(yàn)方法:從斜面上挑取小量培養(yǎng)物作穿刺接種,同時(shí)接種兩支培養(yǎng)基,其中一支于接種后滴加溶化的1%瓊脂液于表面,高度約1cm,于36±1℃培養(yǎng).
09、 馬尿酸鈉培養(yǎng)基
成分:
馬尿酸鈉 1g
肉浸液 100mL
制法:將馬尿酸鈉溶解于肉浸液內(nèi),分裝于小試管內(nèi),并于管壁畫一橫線.以標(biāo)志管內(nèi)液面高度,高壓滅菌121℃20min.
試劑:三氯化鐵(FeCl3·6H2O)12g,溶于2%鹽酸溶液100mL中即成.
試驗(yàn)方法：用純培養(yǎng)物接種,于42℃培養(yǎng)48h,觀察培養(yǎng)液是否到達(dá)試管壁上記號(hào)處,如不足時(shí),用蒸餾水補(bǔ)足至原量.經(jīng)離心沉淀,吸取上清液0.8mL,加入三氯化鐵試劑0.2mL,立即混合均勻,經(jīng)10～15min,觀察結(jié)果.
結(jié)果:出現(xiàn)恒久之沉淀物為陽性.
10、營(yíng)養(yǎng)明膠
成分:
蛋白胨 5g
牛肉膏 3g
明膠 120g
蒸餾水 1000mL
pH6.8～7.0
制法:加熱溶解,校正至pH7.4～7.6,分裝小管,121℃高壓滅菌10min,取出后迅速冷卻,使其凝固.復(fù)查最終pH應(yīng)為6.8～7.0.
試驗(yàn)方法:用瓊脂培養(yǎng)物穿刺接種,放在22～25℃培養(yǎng),每天觀察結(jié)果,記錄液化時(shí)間.或放在36士1℃培養(yǎng),每天取出,放冰箱內(nèi)30min后再觀察結(jié)果.
11、苯丙氨酸培養(yǎng)基
成分:
酵母浸膏 3g
DI-苯丙氨酸(或L-苯丙氨酸1g) 2g
磷酸氫二鈉 1g
氯化鈉 5g
瓊脂 12g
蒸餾水 1000mL
制法:加熱溶解后分裝試管,121℃高壓滅菌15min,使成斜面.
試驗(yàn)方法:自瓊脂斜面上挑取大量培養(yǎng)物,移種于苯丙氨酸瓊脂,在36±1℃培養(yǎng)4h或18～24h.滴加10%三氯化鐵溶液2～3滴,自斜面培養(yǎng)物上流下,苯丙氨酸脫氨酶陽性者呈深綠色.
12、 氨基酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基
成分:
蛋白胨 5g
酵母浸膏 3g
葡萄糖 1g
蒸餾水 1000mL
1.6%滇甲酚紫-乙醇溶液 1mL
L-氨基酸或DL-氨基酸 0.5或1g/100mL
pH6.8
制法:除氨基酸以外的成分加熱溶解后,分裝每瓶100mL,分別加入各種氨基酸:賴氨酸,精氨酸和鳥氨酸.L-氨基酸按0.5%加入,DL-氨基酸按1%加入.再行校正pH至6.8.對(duì)照培養(yǎng)基不加氨基酸.分裝于滅菌的小試管內(nèi),每管0.5mL,上面滴加一層液體石蠟,115℃高壓滅菌10min.
試驗(yàn)方法:從瓊脂斜面上挑取培養(yǎng)物接種,于36±1℃培養(yǎng)18～24h,觀察結(jié)果.氨基酸脫羧酶陽性者由于產(chǎn)堿,培養(yǎng)基應(yīng)呈紫色.陰性者無堿性產(chǎn)物,但因葡萄糖產(chǎn)酸而使培養(yǎng)基變?yōu)辄S色.對(duì)照管應(yīng)為黃色.
13、蛋白胨水(靛基質(zhì)試驗(yàn)用)
成分:
蛋白胨(或胰蛋白胨) 20g
氯化鈉 5g
蒸餾水 1000mL
pH7.4
制法:按上述成分配制,分裝小試管,121℃高壓滅菌15min.
靛基質(zhì)試劑
柯凡克試劑:將5g對(duì)二甲氨基苯甲醛溶解于75mL戊醇中.然后緩慢加入濃鹽酸25mL.
歐-波試劑:將1g對(duì)二甲氨基苯甲醛溶解于95mL95%乙醇內(nèi).然后緩慢加入濃鹽酸20mL.
試驗(yàn)方法:挑取小量培養(yǎng)物接種,在36±1℃培養(yǎng)1～2d,必要時(shí)可培養(yǎng)4～5d.加入柯凡克試劑約0.5mL,輕搖試管,陽性者于試劑層呈深紅色;或加入歐-波試劑約0.5mL,沿管壁流下,覆蓋于培養(yǎng)液表面,陽性者于液面接觸處呈玫瑰紅色.
注:蛋白胨中應(yīng)含有豐富的色氨酸.每批蛋白胨買來后,應(yīng)先用已知菌種鑒定后方可使用.
14、 硫酸亞鐵瓊脂(硫化氫試驗(yàn)用)
成分:
牛肉膏 3g
酵母浸膏 3g
蛋白胨 10g
硫酸亞鐵 0.2g
硫代硫酸鈉 0.3g
氯化鈉 5g
瓊脂 12g
蒸餾水 1000mL
pH7.4
制法:加熱溶解,校正pH,分裝試管,115℃高壓滅菌15min,取出直立候其凝固.
試驗(yàn)方法:挑取瓊脂培養(yǎng)物,沿管壁穿刺,于36±1℃培養(yǎng)1～2d,觀察結(jié)果.產(chǎn)硫化氫者使培養(yǎng)基變?yōu)楹谏?
注:腸桿菌科細(xì)菌測(cè)定硫化氫的產(chǎn)生,應(yīng)采用三糖鐵瓊脂或本培養(yǎng)基.
15 、尿素瓊脂
成分:
蛋白胨 1g
氯化鈉 5g
葡萄糖 1g
磷酸二氫鉀 2g
0.4%酚紅溶液 3mL
瓊脂 20g
蒸餾水 1000mL
20%尿素溶液 100mL
pH7.2±0.1
制法:將除尿素和瓊脂以外的成分配好,并校正pH,加入瓊脂,加熱溶化并分裝燒瓶.121℃高壓滅菌15min.冷至50～55℃,加入經(jīng)除菌過濾的尿素溶液.尿素的最終濃度為2%,最終pH應(yīng)為7.2±0.1.分裝于滅菌試管內(nèi),放成斜面?zhèn)溆?
試驗(yàn)方法:挑取瓊脂培養(yǎng)物接種,在36±1℃培養(yǎng)24h,觀察結(jié)果.尿素酶陽性者由于產(chǎn)堿而使培養(yǎng)基變?yōu)榧t色.
16、 氰化鉀(KCN)培養(yǎng)基
成分:
蛋白胨 10g
氯化鈉 5g
磷酸二氫鉀 0.225g
磷酸氫二鈉 5.64g
蒸餾水 1000mL
0.5%氰化鉀溶液 20mL
pH7.6
制法:將除氰化鉀以外的成分配好后分裝燒瓶,121℃高壓滅菌15min.放在冰箱內(nèi)使其充分冷卻.每100mL培養(yǎng)基加入0.5%氰化鉀溶液2.0mL(最后濃度為1:10000),分裝于12mm×100mm滅菌試管,每管約4mL,立刻用滅菌橡皮塞塞緊,放在4℃冰箱內(nèi),至少可保存兩個(gè)月.同時(shí),將不加氰化鉀的培養(yǎng)基作為對(duì)照培養(yǎng)基,分裝試管備用.
17 、氧化酶試驗(yàn)
試劑:
1%鹽酸二甲基對(duì)苯二胺溶液:少量新鮮配制,干冰箱內(nèi)避光保存.
1%α-萘酚-乙醇溶液.
試驗(yàn)方法:取白色潔凈濾紙沾取菌落.加鹽酸二甲基對(duì)苯二胺溶液一滴,陽性者呈現(xiàn)粉紅色,并逐漸加深;再加α-萘酚溶液一滴,陽性者于半分鐘內(nèi)呈現(xiàn)鮮藍(lán)色.陰性于兩分鐘內(nèi)不變色.以毛細(xì)吸管吸取試劑,直接滴加于菌落上,其顯色反應(yīng)與以上相同.
18、 硝酸鹽培養(yǎng)基
成分:
硝酸鉀 0.2g
蛋白 5g
蒸餾水 1000mL
pH7.4
制法:溶解,校正pH,分裝試管,每管約5mL,121℃高壓滅菌15min.
硝酸鹽還原試劑:
甲液:將對(duì)氨基苯磺酸0.8g溶解于2.5mol/L乙酸溶液100mL中.
乙液:將甲萘胺0.5g溶解于2.5mol/L乙酸溶液100mL中.
試驗(yàn)方法:接種后在36±1℃培養(yǎng)1～4d,加入甲液和乙液各一滴,觀察結(jié)果.硝酸鹽還原為亞硝酸鹽時(shí)于立刻或數(shù)分鐘內(nèi)顯紅色.
注:本試驗(yàn)陰性的原因有三:細(xì)菌不能還原硝酸鹽;亞硝酸鹽繼續(xù)分解,生成氨和氮;培養(yǎng)基不適于細(xì)菌的生長(zhǎng).如欲檢查培養(yǎng)基中硝酸鹽是否未被分解,可再加入鋅粉少許,可使硝酸鹽還原為亞硝酸鹽而呈現(xiàn)紅色.
19 、細(xì)胞色素氧化酶試驗(yàn)
試劑:
1%鹽酸二甲基對(duì)苯二胺溶液.
1%α-萘酚-乙醇溶液.
試驗(yàn)方法:取37℃(或低于37℃)培養(yǎng)20h的斜面培養(yǎng)物一支,將兩種試劑各2～3滴,從斜面上端滴下,并將斜面略加傾斜,使試劑混合液流經(jīng)斜面上的培養(yǎng)物.如系平板培養(yǎng)物,則可用試劑混合液滴在菌落上.
結(jié)果:于2min內(nèi)呈現(xiàn)藍(lán)色者為陽性.陽性培養(yǎng)物大多數(shù)于半分鐘內(nèi)出現(xiàn)強(qiáng)陽性反應(yīng),2min以后出現(xiàn)微弱或可疑反應(yīng)均作為陰性結(jié)果.
20 、過氧化氫酶試驗(yàn)
試劑:3%過氧化氫溶液:臨用時(shí)配制.
試驗(yàn)方法:挑取固體培養(yǎng)基上菌落一接種環(huán),置于潔凈試管內(nèi),滴加3%過氧化氫溶液2mL,觀察結(jié)果.
結(jié)果:于半分鐘內(nèi)發(fā)生氣泡者為陽性,不發(fā)生氣泡者為陰性.
21、 過氧化物酶試驗(yàn)
試劑:2%兒茶酚溶液.
3%過氧化氫溶液.
試驗(yàn)方法:挑取固體培養(yǎng)基上菌落一接種環(huán),置于潔凈試管內(nèi),滴加2%兒茶酚溶液1mL及3%過氧化氫溶液1mL.靜置于室溫(20℃)中30～60min,觀察結(jié)果.
結(jié)果:陽性反應(yīng),細(xì)菌變?yōu)楹诤稚?陰性反應(yīng),細(xì)菌不變色.
注:過氧化物酶的作用可受氰化鉀的抑制.
22 、磷酸鹽緩沖液
儲(chǔ)存液
磷酸二氫鉀 34g
1mol/L氫氧化鈉溶液 175mL
蒸餾水 825mL
pH7.2
制法:先將磷酸鹽溶解于500mL蒸餾水中,用1mol/L氫氧化鈉溶液校正pH后,再用蒸餾水稀釋至1000mL.
稀釋液:取儲(chǔ)存液1.25mL,用蒸餾水稀釋至1000mL.分裝每瓶100mL或每管10mL,121℃高壓滅菌15min.
23、明膠磷酸鹽緩沖液
成分:
明膠 2g
磷酸氫二鈉 4g
蒸餾水 1000mL
pH6.2
制法:加熱溶解,校正pH,121℃高壓滅菌15min.
24、 乳酸-苯酚溶液
成分:
苯酚 10g
乳酸(比重1.21) 10g
甘油 20g
蒸餾水 10mL
制法:將苯酚在水中加熱溶解,然后加入乳酸及甘油.
用途:檢驗(yàn)真菌形態(tài)時(shí)用.
25 、肉浸液肉湯
成分:
絞碎牛肉 500g
氯化鈉 5g
蛋白胨 10g
磷酸氫二鉀 2g
蒸餾水 1000mL
制法:將絞碎之去筋膜無油脂牛肉500g加蒸餾水1000mL,混合后放冰箱過夜,除去液面之浮油,隔水煮沸半小時(shí),使肉渣完全凝結(jié)成塊,用絨布過濾,并擠壓收集全部濾液,加水補(bǔ)足原量.加入蛋白胨,氯化鈉和磷酸鹽,溶解后校正pH7.4～7.6煮沸并過濾,分裝燒瓶,121℃高壓滅菌30min.
26、肉浸液瓊脂
成分:
肉浸液肉湯(PH7.4) 1000mL
瓊脂 17～20g
制法:加熱溶化瓊脂,分裝燒瓶或試管,121℃高壓滅菌30min.根據(jù)需要,傾注平板或放成斜面.
27、牛肉(或牛心)消化湯
成分:
絞碎牛肉(或牛心) 1000g
15%氫氧化鈉溶液 27mL
胰蛋白酶 40mL
三氯甲烷 1mL
氯化鈉 10g
蒸餾水 2000mL
制法:
1 、稱取碎牛肉,加蒸餾水,隔水加熱到80℃,維持15min.
2、 加氫氧化鈉溶液,對(duì)pH試紙呈弱堿性,冷至40℃.
3 、加胰蛋白酶,氯仿,在36±1℃放置4～5h,每小時(shí)搖動(dòng)一二次.
4、 4h后,吸取上層液5mL于試管中,加5%硫酸銅溶液0.1mL,4%氫氧化鈉溶液5mL,混合之.若呈紅色,則不須再消化,可由溫箱取出.
5、加入15%乙酸溶液45mL,對(duì)pH試紙呈酸性.
6、 煮沸15min,使胰蛋白酶破壞,冷后,放冰箱內(nèi)一夜.
7 、次日吸取上層清液,加氯化鈉10g,并加水補(bǔ)足原量,煮沸.
8、 校正pH7.4～7.6(加15%氫氧化鈉溶液約10mL),加熱,用濾紙過濾,分裝燒瓶,121℃高壓滅菌20min.
注：
①此培養(yǎng)基可作為瓊脂培養(yǎng)基的基礎(chǔ),不需加蛋白胨.
②胰蛋白酶之配制:稱取去脂絞碎的豬胰500g,加入乙醇500mL,蒸餾水1500mL,混合之,裝人玻塞瓶?jī)?nèi).每日搖勻三次.3d后,用絨布過濾擠出其汁,加鹽酸至0.05%,放冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆?
28、血消化湯
成分:
絞碎豬胃 100g
絞碎豬血塊 100g
蒸餾水 1000mL
濃鹽酸 10mL
制法:
1 、洗滌豬胃,除去油脂,保留胃粘膜,用絞肉機(jī)絞碎.
2 、用絞肉機(jī)將豬血塊絞碎.
3 、將蒸餾水加熱至55℃,加入豬胃,豬血塊和鹽酸,置55℃水浴中24h,時(shí)常加以搖動(dòng).
4 、從水浴內(nèi)取出,加入1moL/L碳酸鈉溶液5mL,煮沸10min,置于冰箱內(nèi)一夜.
5、 吸取上層清液,加磷酸氫二鉀1g,加熱至75℃,加入1mol/L碳酸鈉溶液45mL,煮沸,校正pH7.2～7.4.
6、用濾紙過濾,分裝燒瓶,121℃高壓滅菌20min.
29：豆粉瓊脂
成分:
牛心消化湯(PH7.4～7.6) 1000mL
瓊脂 20g
黃豆粉浸液 50mL
制法:將瓊脂加在牛心消化湯內(nèi),加熱溶解,過濾.加入豌豆粉浸液,分裝每瓶100mL,121℃高壓滅菌15min.
豌豆粉浸液制法:取豌豆粉5g,氯化鈉10g,加入蒸餾水100mL.置100℃水浴內(nèi)加熱1h,放于冰箱中過夜.吸取上清液即為豌豆浸液.
30、血瓊脂
成分:
pH7.4～7.6豆粉瓊脂 100mL
脫纖維羊血(或兔血) 5～10mL
制法:加熱溶化瓊脂,冷至50℃,以滅菌手續(xù)加入脫纖維羊血,搖勻,傾注平板.亦可分裝滅菌試管,置成斜面.亦可用其他營(yíng)養(yǎng)豐富的基礎(chǔ)培養(yǎng)基配制血瓊脂.
31、營(yíng)養(yǎng)瓊脂
成分:
蛋白胨 10g
牛肉膏 3g
氯化鈉 5g
瓊脂 15～20g
蒸餾水 1000mL
制法:將除瓊脂以外的各成分溶解于蒸餾水內(nèi),加入15%氫氧化鈉溶液約2mL,校正pH至7.2～7.4.加入瓊脂,加熱煮沸,使瓊脂溶化.分裝燒瓶,121℃高壓滅菌15min.
注:此培養(yǎng)基可供一般細(xì)菌培養(yǎng)之用,可傾注平板或制成斜面.如用于菌落計(jì)數(shù),瓊脂量為1.5%;如作成平板或斜面,則應(yīng)為2%.
32、營(yíng)養(yǎng)肉湯
成分:
蛋白陳 10g
牛肉膏 3g
氯化鈉 5g
蒸餾水 1000mL
pH7.4
制法:按上述成分混合,溶解后校正pH,分裝燒瓶,每瓶225mL,121℃高壓滅菌15min.
33 、乳糖膽鹽發(fā)酵管
成分:
蛋白胨 20g
豬膽鹽(或牛,羊膽鹽) 5g
乳糖 10g
0.04%滇甲酚紫水溶液 25mL
蒸餾水 1000mL
pH7.4
制法:將蛋白胨,膽鹽及乳糖溶于水中,校正pH,加入指示劑,分裝每管10mL,并放入一個(gè)小倒管,115℃高壓滅菌15min.
注:雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管除蒸餾水外,其他成分加倍.
34、乳糖發(fā)酵管
成分:
蛋白胨 20g
乳糖 10g
0.04%溴甲酚紫水溶液 25mL
蒸餾水 1000mL
pH7.4
制法:將蛋白胨及乳糖溶于水中,校正pH,加入指示劑,按檢驗(yàn)要求分裝30mL,10mL或3mL,并放入一個(gè)小倒管,115℃高壓滅菌15min.
注:①雙料乳糖發(fā)酵管除蒸餾水外,其他成分加倍.
②30mL和10mL乳糖發(fā)酵管專供醬油及醬類檢驗(yàn)用,3mL乳糖發(fā)酵管供大腸菌群證實(shí)試驗(yàn)用.
35 、EC肉湯
成分:
胰蛋白胨 20g
3號(hào)膽鹽(或混合膽鹽) 1.5g
乳糖 5g
磷酸氫二鉀 4g
磷酸二氫鉀 1.5g
氯化鈉 5g
蒸餾水 1000mL
制法:將上述成分混合,溶解后,分裝有發(fā)酵倒管的試管中,121℃高壓滅菌15min,最終pH為6.9±0.2.
36、 緩沖蛋白胨水(BP)
成分:
蛋白胨 10g
氯化鈉 5g
磷酸氫二鈉(Na2HPO4·12H2O) 9g
磷酸二氫鉀 1.5g
蒸餾水 1000mL
pH7.2
制法:按上述成分配好后以大燒瓶裝,121℃高壓滅菌15min.臨用時(shí)無菌分裝每瓶225mL.
注:本培養(yǎng)基供沙門氏菌前增菌用.
37 、氯化鎂孔雀綠增菌液(MM)
甲液
胰蛋白胨 5g
氯化鈉 8g
磷酸二氫鉀 1.6g
蒸餾水 1000mL
乙液
氯化鎂(化學(xué)純) 40g
蒸餾水 100mL
4.13.3 丙液
0.4%孔雀綠水溶液.
制法:分別按上述成分配好后,121℃高壓滅菌15min備用.臨用時(shí)取甲液90mL,乙液9mL,丙液0.9mL,以無菌操作混合即可.
注:本培養(yǎng)基亦稱Rappaport 10(R10)增菌液.
38 、四硫磺酸鈉煌綠增菌液(TTB)
基礎(chǔ)培養(yǎng)基
多胨或眎胨 5g
膽鹽 1g
碳酸鈣 10g
硫代硫酸鈉 30g
蒸餾水 1000mL
碘溶液
碘 6g
碘化鉀 5g
蒸餾水 20mL
制法:將基礎(chǔ)培養(yǎng)基的各成分加入蒸餾水中,加熱溶解,分裝每瓶100mL.分裝時(shí)應(yīng)隨時(shí)振搖,使其中的碳酸鈣混勻.121℃高壓滅菌15min備用.臨用時(shí)每100mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入碘溶液2mL,0.1%煌綠溶液1mL.
39 四硫磺酸鈉煌綠增菌液(換用方法)
基礎(chǔ)液:
蛋白胨 10g
牛肉膏 5g
氯化鈉 3g
碳酸鈣 45g
蒸餾水 1000mL
將各成分加入于蒸餾水中,加熱至約70℃溶解,校正pH至7.0±0.1,121℃高壓滅菌20min.
硫代硫酸鈉溶液
硫代硫酸鈉(Na2S2O3·5H2O) 50g
蒸餾水加至100mL
碘溶液
碘片 20g
碘化鉀 25g
蒸餾水加至 100mL
將碘化鉀充分溶解于是少量的蒸餾水中,加入碘片,振搖玻瓶至碘片全部溶解,再加入蒸餾水至規(guī)定量.貯于棕色玻瓶?jī)?nèi),緊塞瓶蓋備用.
煌綠水溶液
煌綠 0.5g
蒸餾水 100mL
存放暗處,不少于1d,使其自然滅菌.
牛膽鹽溶液
干燥的牛膽鹽 10g
蒸餾水 100mL
煮沸溶解,121℃高壓滅菌20min.
制備:
基礎(chǔ)液 900mL
硫代硫酸鈉溶液 100mL
碘液 20mL
煌綠溶液 2mL
牛膽鹽溶液 50mL
臨用前,按上列順序,以無菌操作依次加入于基礎(chǔ)液中,每加入一種成分,均應(yīng)搖勻后再加入另一種成分.分裝于滅菌瓶中,每瓶100mL.
40 亞硒酸鹽胱氨酸增菌液(SC)
成分:
蛋白胨 5g
乳糖 4g
亞硒酸氫鈉 4g
磷酸氫二鈉 5.5g
磷酸二氫鉀 4.58
L-胱氨酸 0.01g
蒸餾水 1000mL
1%L-胱氨酸-氫氧化鈉溶液的配法:稱取L-胱氨酸0.1g(或DL-胱氨酸0.2g),加1mol/L氫氧化鈉1.5mL,使溶解,再加入蒸餾水8.5mL即成.
制法:將除亞硒酸氫鈉和L-胱氨酸以外的各成分溶解于900mL蒸餾水中,加熱煮沸,俟冷備用.另將亞硒酸氫鈉溶解于100mL蒸餾水中,加熱煮沸,候冷,以無菌操作與上液混合.再加入1%L-胱氨酸-氫氧化鈉溶液1mL.分裝于滅菌瓶中,每瓶100mL,pH應(yīng)為7.0±0.1.
41 GN增菌液
成分:
胰蛋白胨 20g
葡萄糖 1g
甘露醇 2g
檸檬酸鈉 5g
去氧膽酸鈉 0.5g
磷酸氫二鉀 4g
磷酸二氫鉀 1.5g
氯化鈉 5g
蒸餾水 1000mL
pH7.0
制法:按上述成分配好,加熱使溶解,校正pH.分裝每瓶225mL,115℃高壓滅菌15min.
42 腸道菌增菌肉湯
成分:
蛋白胨1 10g
葡萄糖 5g
牛膽鹽 20g
磷酸氫二鈉 8g
磷酸二氫鉀 2g
煌綠 0.015g
蒸餾水 1000mL
pH7.2
制法:按上述成分配好,加熱使溶解,校正pH.分裝每瓶30mL,115℃高壓滅菌15min.
43 亞硫酸鉍瓊脂(BS)
成分:
蛋白胨 10g
牛肉膏 5g
葡萄糖 5g
硫酸亞鐵 0.3g
磷酸氫二鈉 4g
煌綠 0.025g
檸檬酸鉍銨 2g
亞硫酸鈉 6g
瓊脂 18～20g
蒸餾水 1000mL
pH7.5
制法:
1 將前面5種成分溶解于300mL蒸餾水中.
2 將檸檬酸鉍銨和亞硫酸鈉另用50mL蒸餾水溶解.
3 將瓊脂于600mL蒸餾水中煮沸溶解,冷至80℃
4 將以上三液合并,補(bǔ)充蒸餾水至1000mL,校正pH,加0.5%煌綠水溶液5mL,搖勻.冷至50～55℃,傾注平皿.
注:此培養(yǎng)基不需高壓滅菌.制備過程不宜過分加熱.以免降低其選擇性.應(yīng)在臨用前一天制備,貯存于室溫暗處.超過48h不宜使用.
44 DHL瓊脂
成分:
蛋白胨 20g
牛肉膏 3g
乳糖 10g
蔗糖 10g
去氧膽酸鈉 1g
硫代硫酸鈉 2.3g
檸檬酸鈉 1g
檸檬酸鐵銨 1g
中性紅 0.03g
瓊脂 18～20g
蒸餾水 1000mL
pH7.3
制法:將除中性紅和瓊脂以外的成分溶解于400mL蒸餾水中,校正pH. 再將瓊脂于600mL蒸餾水中煮沸溶解,兩液合并,并加入0.5%中性紅水溶液6mL,待冷至50～55℃,傾注平板.
45 HE瓊脂
成分:
脙胨 12g
牛肉膏 3g
乳糖 12g
蔗糖 12g
水楊素 2g
膽鹽 20g
氯化鈉 5g
瓊脂 18～20g
蒸餾水 1000mL
0.4%溴麝香草酚藍(lán)溶液 16mL
Andrade指示劑 20mL
甲液 20mL
乙液 20mL
pH7.5
制法:將前面七種成分溶解于400mL蒸餾水內(nèi)作為基礎(chǔ)液;將瓊脂加入于600mL蒸餾水內(nèi),加熱溶解.加入甲液和乙液于基礎(chǔ)液內(nèi),校正pH.再加入指示劑,并與瓊脂液合并,待冷至50～55℃,傾注平板.
注:①此培養(yǎng)基不可高壓滅菌.
②甲液的配制
硫代硫酸鈉 34g
檸檬酸鐵銨 4g
蒸餾水 100mL
②乙液的配制
去氧膽酸鈉 10g
蒸餾水 100mL
②Andrade指示劑
酸性復(fù)紅 0.5g
1mol/L氫氧化鈉溶液 16mL
蒸餾水 100mL
將復(fù)紅溶解于蒸餾水中,加入氫氧化鈉溶液.數(shù)小時(shí)后如復(fù)紅褪色不全,再加氫氧化鈉溶液1～2mL.
46 SS瓊脂
基礎(chǔ)培養(yǎng)基:
牛肉膏 5g
眎胨 5g
三號(hào)膽鹽 3.5g
瓊脂 17g
蒸餾水 1000mL
再將兩液混合,121℃高壓滅菌15min,保存?zhèn)溆?
完全培養(yǎng)基:
基礎(chǔ)培養(yǎng)基 100mL
乳糖 10g
檸檬酸鈉 8.5g
硫代硫酸鈉 8.5g
10%檸檬酸鐵溶液 10mL
1%中性紅溶液 2.5mL
0.1%煌綠溶液 0.33mL
加熱溶化基礎(chǔ)培養(yǎng)基,按比例加入上述染料以外之各成分,充分混合均勻,校正至pH7.0,加入中性紅和煌綠溶液,傾注平板.
注:①制好的培養(yǎng)基宜當(dāng)日使用,或保存于冰箱內(nèi)于48h內(nèi)使用.
②煌綠溶液配好后應(yīng)在10d以內(nèi)使用.
③可以購(gòu)用SS瓊脂的干燥培養(yǎng)基.
47 WS瓊脂
成分:
②胨 12g
牛肉膏 3g
氯化鈉 5g
乳糖 12g
蔗糖 12g
十二烷基硫酸鈉 2g
瓊脂 15g
Andrade指示劑 20mL
0.4%溴麝香草酚藍(lán)溶液 16mL
甲液 20mL
蒸餾水 1000mL
pH7.0
制法:除指示劑和甲液外,將其他成分加熱溶解,不需消毒,校正pH后加入指示劑和甲液,傾注平板應(yīng)呈草綠色. 注:①供沙門氏菌分離用.
②Andrade指示劑和甲液的配制均見HE瓊脂.
48 麥康凱瓊脂
成分:
蛋白胨 17g
眎胨 3g
豬膽鹽(或牛,羊膽鹽) 5g
氯化鈉 5g
瓊脂 17g
蒸餾水 1000mL
乳糖 10g
0.01%結(jié)晶紫水溶液 10mL
0.5%中性紅水溶液 5mL
制法:
1 將蛋白胨,眎,膽鹽和氯化鈉溶解于400mL蒸餾水中,校正pH7.2.將瓊脂加入600mL
加熱溶解.將兩液合并,分裝于燒瓶?jī)?nèi),121℃高壓滅菌15min備用.
2 臨用時(shí)加熱溶化瓊脂,趁熱加入乳糖,冷至50～55℃時(shí),加入結(jié)晶紫和中性紅水溶液,搖勻后傾注平板.
注:結(jié)晶紫及中性紅水溶液配好后須經(jīng)高壓滅菌.
49 伊紅美藍(lán)瓊脂(EMB)
成分:
蛋白胨 10g
乳糖 10g
磷酸氫二鉀 2g
瓊脂 17g
2%伊紅Y溶液 20mL
0.65%美藍(lán)溶液 10mL
蒸餾水 1000mL
pH7.1
制法:將蛋白胨,磷酸鹽和瓊脂溶解于蒸餾水中,校正pH,分裝于燒瓶?jī)?nèi),121℃高壓滅菌15min備用.臨用時(shí)加入乳糖并加熱溶化瓊脂,冷至50～55℃,加入伊紅和美藍(lán)溶液,搖勻,傾注平板.
50三糖鐵瓊脂(TSI)
成分:
蛋白胨 20g
牛肉膏 5g
乳糖 10g
蔗糖 10g
葡萄糖 1g
氯化鈉 5g
硫酸亞鐵銨〔Fe(NH4)2(SO4)2·6H2O〕 0.2g
硫代硫酸鈉 0.2g
瓊脂 12g
酚紅 0.025g
蒸餾水 1000mL
pH7.4
制法:將除瓊脂和酚紅以外的各成分溶解于蒸餾水中,校正pH.加入瓊脂,加熱煮沸,以溶化瓊脂.加入0.2%酚紅水溶液12.5mL,搖勻.分裝試管,裝量宜多些,以便得到較高的底層.121℃高壓滅菌15min.放置高層斜面?zhèn)溆?
51 三糖鐵瓊脂(換用方法)
成分:
蛋白胨 15g
眎胨 5g
牛肉膏 3g
酵母膏 3g
乳糖 10g
蔗糖 10g
葡萄糖 1g
氯化鈉 5g
硫酸亞鐵 0.2g
硫代硫酸鈉 0.3g
瓊脂 12g
酚紅 0.025g
蒸餾水 1000mL
pH7.4
制法:將除瓊脂和酚紅以外的各成分溶解于蒸餾水中,校正pH.加入瓊脂,加熱煮沸,以溶化瓊脂.加入0.2%酚紅水溶液12.5mL,搖勻.分裝試管,裝量宜多些,以便得到較高的底層.121℃高壓滅菌15min,放置高層斜面?zhèn)溆?
52 克氏雙糖鐵瓊脂(KI)
上層培養(yǎng)基成分
血消化湯(pH7.6) 500mL
瓊脂 6.5g
硫代硫酸鈉 0.1g
硫酸亞鐵銨 0.1g
乳糖 5g
0.2%酚紅溶液 5mL
下層培養(yǎng)基成分
血消化湯(pH7.6) 500mL
瓊脂 2g
葡萄糖 1g
0.2%酚紅溶液 5mL
制法:
1 取血消化湯按上層和下層的瓊脂用量,分別加入瓊脂,加熱溶解.
2 分別加入其他各種成分.將上層培養(yǎng)基分裝于燒瓶?jī)?nèi);將下層培養(yǎng)基分裝于滅菌12mm×100mm試管內(nèi),每管約2mL.115℃高壓滅菌10min.
3 將上層培養(yǎng)基放在56℃水浴箱內(nèi)保溫;將下層培養(yǎng)基直立放在室溫內(nèi),使其凝固.
4 當(dāng)下層培養(yǎng)基凝固后,以無菌手續(xù)將上層培養(yǎng)基分裝于下層培養(yǎng)基的上面,每管約1.5mL,放成斜面.
53 克氏雙糖鐵瓊脂(換用方法)
成分:
蛋白胨 20g
牛肉膏 3g
酵母膏 3g
乳糖 10g
葡萄糖 1g
氯化鈉 5g
檸檬酸鐵銨 0.5g
硫代硫酸鈉 0.5g
瓊脂 12g
酚紅 0.025g
蒸餾水 1000mL
pH7.4
制法:將除瓊脂和酚紅以外的各成分溶解于蒸餾水中,校正pH.加入瓊脂,加熱煮沸,以溶化瓊脂.加入0.2%酚紅水溶液12.5mL,搖勻.分裝試管,裝量宜多些,以便得到比較高的底層.121℃高壓滅菌15min.放置高層斜面?zhèn)溆?
54 葡萄糖半固體發(fā)酵管
成分:
蛋白胨 1g
牛肉膏 0.3g
氯化鈉 0.5g
1.6%溴甲酚紫酒精溶液 0.1mL
葡萄糖 1g
瓊脂 0.3g
蒸餾水 100mL
pH7.4
制法:將蛋白胨,牛肉膏和氯化鈉加入于水中,校正pH后加入瓊脂加熱溶解,再加入指示劑和葡萄糖,分裝小試管,滅菌121℃ 15 min.
55 5%乳糖發(fā)酵管
成分:
蛋白胨 0.2g
氯化鈉 0.5g
乳糖 5g
2%溴麝香草酚藍(lán)水溶液 1.2mL
蒸餾水 100mL
pH7.4
制法:除乳糖以外的各成分:溶解于50mL蒸餾水內(nèi),校正pH.將乳糖溶解于另外50mL蒸餾水內(nèi),分別滅菌121℃ 15min,將兩液混合,以無菌操作分裝于滅菌小試管內(nèi).
注:在此培養(yǎng)基內(nèi),大部分乳糖遲緩發(fā)酵的細(xì)菌可于1d內(nèi)發(fā)酵.
56 CAYE培養(yǎng)基
此培養(yǎng)基附在腸毒素診斷試劑盒內(nèi),如無此培養(yǎng)基,亦可用Honda氏產(chǎn)毒肉湯.
57 Honda氏產(chǎn)毒肉湯
成分:
水解酪蛋白 20g
酵母浸膏粉 10g
氯化鈉 2.5g
磷酸氫二鈉 15g
葡萄糖 5g
微量元素 0.5mL
蒸餾水 1000mL
pH7.5
制法:溶解后校正pH,高壓滅菌121℃ 15min,待冷至45～50℃時(shí),加入林可霉素溶液,每毫升培養(yǎng)基內(nèi)含90μg.
微量元素配方:硫酸鎂 5g,氯化鐵 0.5g,氯化鉆 2g,蒸餾水 100mL
58 Elek氏培養(yǎng)基(毒素測(cè)定用)
成分:
胨 20g
麥芽糖 3g
乳糖 0.7g
氯化鈉 5g
瓊脂 15g
40%氫氧化鈉溶液 1.5mL
蒸餾水 1000mL
pH7.8
制法:用500mL蒸餾水溶解瓊脂以外的成分,煮沸,并用濾紙過濾.用1mo1/L氫氧化鈉校正pH.用另外500mL蒸餾水加熱溶解瓊脂.將兩液混合,分裝試管10mL或20mL.121℃高壓滅菌15min.臨用時(shí)加熱溶化瓊脂傾注平板.
59 氯化鎂孔雀綠羧芐青霉素培養(yǎng)基
成分:
甲液:胰蛋白胨 10g
蒸餾水 1000mL
乙液:磷酸氫二鈉 9.5g
蒸餾水 1000mL
丙液:氯化鎂(MgCl2·6H2O) 40g
蒸餾水 400mL
以上分別在121℃滅菌15min.
丁液:孔雀綠 0.2g
蒸餾水 100mL
戊液:羧芐青霉素 1mg/mL
制法:取甲液620mL,乙液160mL,丙液212mL混合,再加入丁液6.4mL和戊液2.4mL,即為1000mL培養(yǎng)基.分裝滅菌燒瓶,每瓶100mL,或滅菌試管10mL.
60 胰蛋白胨水
成分:
胰蛋白胨 10g
蒸餾水 1000mL
pH7.0
制法:將上述成分溶解,校正pH.分裝試管,121℃高壓滅菌15min.
61 Rustigian氏尿素培養(yǎng)液
成分:
尿素 20.0g
酵母浸膏 0.1g
磷酸二氫鉀(KH2PO4) 0.091g
磷酸氫二鈉(Na2HPO4) 0.095g
酚紅 0.01g
蒸餾水 1000mL
制法:將上述成分:于蒸餾水中溶解,校正pH為6.8±0.2.不要加熱,過濾除菌,無菌分裝于滅菌小試管中,每管為約3mL.
用途:尿素酶試驗(yàn)用.
62 氯化鈉結(jié)晶紫增菌液
成分:
蛋白胨 20g
氯化鈉 40g
0.01%結(jié)晶紫溶液 5mL
蒸餾水 1000mL
pH9.0
制法:
除結(jié)晶紫外,其他按上述成分:配好,加熱溶解.約加30%氫氧化鉀溶液4.5mL,校正pH.加熱煮沸,過濾.再加入結(jié)晶紫溶液,混合后分裝試管.121℃高壓滅菌15min.
63 氯化鈉蔗糖瓊脂
成分:
蛋白胨 10g
牛肉膏 10g
氯化鈉 50g
蔗糖 10g
瓊脂 18g
0.2%溴麝香草酚藍(lán)溶液 20mL
蒸餾水 1000mL
pH7.8
制法:將牛肉膏,蛋白胨及氯化鈉溶解于蒸餾水中,校正pH.加入瓊脂,加熱溶解,過濾.加入指示劑,分裝燒瓶100mL.121℃高壓滅菌15min備用.臨用前在100mL培養(yǎng)基內(nèi)加入蔗糖1g,加熱溶化并冷至50℃,傾注平板.
64 嗜鹽菌選擇性瓊脂
成分:
蛋白胨 20g
氯化鈉 40g
瓊脂 17g
0.01%結(jié)晶紫溶液 5mL
蒸餾水 1000mL
pH8.7
制法:除結(jié)晶紫和瓊脂外,其他按上述成分配好,校正pH.加入瓊脂,加熱溶解.再加入結(jié)晶紫溶液,分裝燒瓶,每瓶100mL.
65 3.5%氯化鈉三糖鐵瓊脂
成分:
三糖鐵瓊脂 1000mL
氯化鈉 30g
制法:按前面三糖鐵瓊脂,再加入氯化鈉30g,分裝試管,121℃高壓滅菌15min.放置高層斜面?zhèn)溆?
66 氯化鈉血瓊脂
成分:
酵母膏 3g
蛋白胨 10g
氯化鈉 70g
磷酸氫二鈉 5g
甘露醇 10g
結(jié)晶紫 0.001g
瓊脂 15g
蒸餾水 1000mL
制法:調(diào)pH8.0加熱30min(不必高壓),待冷至45℃左右時(shí),加入新鮮人或兔血(5%～10%)混合均勻,傾注平皿.
67 3.5%氯化鈉生化試驗(yàn)培養(yǎng)基
成分及制法:根據(jù)所需糖的種類按3.2配制.只是將氯化鈉含量改為3.5%,pH為7.7.
68 改良磷酸鹽緩沖液(小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌專用)
成分:
磷酸氫二鈉(Na2HPO4 8.23g
磷酸二氫鈉(NaH2PO4·H2O) 1.2g
氯化鈉(NaCl) 5.0g
三號(hào)膽鹽 1.5g
山梨醇 20g
制法:將磷酸鹽及氯化鈉溶于蒸餾水中,再加入三號(hào)膽鹽及山梨醇,溶解后校正pH為7.6,分裝試管,于121℃高壓滅菌15min,備用.
69 CIN-1培養(yǎng)基
基礎(chǔ)培養(yǎng)基
胰胨 20.0g
酵母浸膏 2.0g
甘露醇 20.0g
氯化鈉 1.0g
去氧膽酸鈉 2.0g
硫酸鎂(MgSO4·7H2O) 0.01g
瓊脂 12.0g
蒸餾水 950mL
pH7.5±0.1
將基礎(chǔ)培養(yǎng)基高壓滅菌.
Irgasan
以95%的乙醇作溶劑,溶解二苯醚,配成0.4%的溶液,待基礎(chǔ)液冷至80℃時(shí),加入1mL混勻.
冷至50℃時(shí),加入:
中性紅(3mg/mL) 10.0mL
結(jié)晶紫(0.1mg/mL) 10.0mL
頭孢菌素(1.5mg/mL) 10.0mL
新生霉素(0.25mg/mL) 10.0mL
最后不斷攪拌著加入10.0mL的10%氯化鍶,倒平皿.
70 嗜鹽性試驗(yàn)培養(yǎng)基
成分:
蛋白胨 2g
氯化鈉按不同量加
蒸餾水 100mL
pH7.7
制法:配制2%蛋白胨水,校正pH,共配制5瓶,每瓶100mL.每瓶分別加入不同量的氯化鈉:(1)不加;(2)3g;(3)7g;(4)9g;(5)11g.待溶解后分裝試管.121℃高壓滅菌15min
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